取0.1 mL二茂铁标准溶液和1 mL不同浓度（3.15～44.15 mmol/L）的过氧化氢异丙苯溶液于不同的试管中，加入用异丙醇定容至5 mL，茂铁加入0.1 mL甲酸后用异丙醇定容至5 mL。检测建立在60℃的植物值方恒温水浴条件下加热40 min，结束后立即用流动水冷却至室温，油过氧化使用异丙醇校准基线在310 nm处检测吸光度值，利用通过二茂铁与过氧化氢异丙苯在不同摩尔比时的茂铁吸光度确定二者反应的饱和摩尔比。
试管中加入1 mL二茂铁标准溶液后，加入1 mL浓度为15.77 mmol/L的植物值方过氧化氢异丙苯溶液，然后分别加入0.1 mL有机酸（甲酸，油过氧化乙酸）和无机酸（硫酸），利用异丙醇定容至5 mL。茂铁60℃的检测建立恒温水浴锅中反应40 min，反应完成后在200～600 nm下进行全波长扫描。植物值方
选择30，40，50，60，70℃5组不同的温度。每个样品中分别加入1 mL二茂铁标准溶液和1 mL浓度为15.77 mmol/L的过氧化氢异丙苯溶液，加入0.1 mL甲酸后用异丙醇定容至5 mL，在不同的反应温度下加热40 min，反应后冷却至室温在310 nm处进行检测。设置10，20，30，40，50 min反应时间，同样的反应条件下在310 nm处检测吸光度变化。
取0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL浓度为15.77 mmol/L的过氧化氢异丙苯溶液于试管中，加入1 mL二茂铁标准溶液和0.1 mL甲酸，异丙醇定容至5 mL，在最佳检测条件下以过氧化氢异丙苯的浓度(x)为横坐标，吸光度值(y)为纵坐标绘制标准曲线。按式（2）计算油脂过氧化值。
式中：
PV——过氧化值，mmol/kg；
Y——样品的吸光度；
B——空白的吸光度；
A——标准曲线的系数；
M——取样量，g；
参照文献的方法确定二茂铁法的检出限。在玻璃管种分别加入0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 mL的1.58 mmol/L的过氧化氢异丙苯溶液，再加入1 mL二茂铁标准溶液和0.1 mL的甲酸，用异丙醇定容至5 mL（相当于样品中过氧化氢异丙苯浓度为0.00，0.03，0.06，0.10，0.13，0.16，0.19，0.22，0.252，0.28，0.32 mmol/L）。在恒温水浴锅中60℃加热40 min，加热结束后立即用流动水冷却至室温，在310 nm处检测其吸光度。得到检出限的估计值后按照加标浓度为估计检出限的1～5倍范围确定过氧化氢异丙苯添加量，在干净的试管中加入合适的过氧化氢异丙苯溶液（15.77 mmol/L），再加入1 mL二茂铁标准溶液和0.1 mL的甲酸，用异丙醇定容至5 mL，在60℃下加热40 min，加热结束后立即用流动水冷却至室温，在310 nm处检测吸光度值，共检测7组平行。根据式（3）求得方法检出限，以方法检出限的3.3倍为定量限。
式中：
LD——方法检出限，mmol/L；
s——加标样品测试结果的标准偏差；
t——自由度为n-1时的Student's值，可查值表得到，当n=7时，在99%置信区间（α=0.01）下，t=3.14；
n——加标样品数量，一般取7。
在试管中分别加入1 mL空白油样、低加标油样（3.15 mmol/L过氧化氢异丙苯）、中加标油样（7.89 mmol/L过氧化氢异丙苯）、高加标油样（12.62 mmol/L过氧化氢异丙苯），再加入1 mL二茂铁标准溶液和0.1 mL的甲酸，用异丙醇定容至5 mL，在60℃条件下加热40 min，然后在310 nm下检测样品的吸光度值。
按GB 5009.227—2016执行。
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